什么是熒光顯微鏡?
??熒光顯微鏡是利用激光、超高壓汞燈或氙燈作為光源來觀察物體中熒光物質(zhì)熒光的裝置。普通光學(xué)顯微鏡使用鹵素?zé)?font style="color: rgb(33, 37, 41); font-family: -apple-system, BlinkMacSystemFont, "Segoe UI", Roboto, "Helvetica Neue", Arial, "Noto Sans", sans-serif, "Apple Color Emoji", "Segoe UI Emoji", "Segoe UI Symbol", "Noto Color Emoji"; font-size: 14px; box-sizing: border-box; vertical-align: inherit;">的可見光作為光源來照亮物體并觀察反射光和透射光。
熒光顯微鏡是顯微鏡的一種,其主要觀察對象是用發(fā)出熒光的物質(zhì)標(biāo)記的生物組織和細胞。顯微鏡的分辨率取決于所用光的波長,因此使用短波長光的熒光顯微鏡具有卓越的空間和時間分辨率。
因此,可以獲得高度定量的信息。熒光顯微鏡變得越來越復(fù)雜,例如共焦激光顯微鏡和多光子顯微鏡,并且變得越來越重要。
熒光顯微鏡的應(yīng)用
熒光顯微鏡主要用于生物成像。具體目標(biāo)是細胞和組織,也可以在它們活著的時候進行觀察。為了對目標(biāo)進行熒光標(biāo)記,需要結(jié)合使用以下技術(shù):
- 通過基因重組等對特定蛋白質(zhì)進行熒光標(biāo)記的技術(shù)。
- 使用熒光標(biāo)記化學(xué)品標(biāo)記核酸等的技術(shù)
- 在特定細胞中表達熒光蛋白的技術(shù)
這些技術(shù)使我們能夠觀察目標(biāo)蛋白和表達基因的定位。此外,還開發(fā)了針對特定物質(zhì)發(fā)出熒光的藥物和蛋白質(zhì),使得神經(jīng)活動和細胞內(nèi)物質(zhì)動態(tài)的可視化成為可能。
近年來,CRISPR技術(shù)的出現(xiàn)使得創(chuàng)建轉(zhuǎn)基因生物變得更加容易,并且其應(yīng)用范圍正在迅速擴大。
熒光顯微鏡原理
熒光顯微鏡是觀察熒光的裝置。當(dāng)熒光物質(zhì)吸收特定的光作為能量(激發(fā)光)并再次釋放能量時,就會發(fā)出熒光。
激發(fā)光照射后立即發(fā)光。熒光的波長比激發(fā)光的波長長,并且這些波長根據(jù)熒光團而變化。熒光顯微鏡具有由以下部件組成的濾光器單元,用于觀察特定的熒光。
- 傳輸來自光源的激發(fā)光的濾光片
- 允許發(fā)射的熒光通過的濾光片
- 防止激發(fā)光干擾熒光的鏡子
通過更換或組合濾光片單元,可以從同一樣本中觀察到多種熒光物質(zhì)。